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神經(jīng)元原代培養的培養步驟具體如下

更新時(shí)間:2024-05-29      點(diǎn)擊次數:299
  神經(jīng)元原代培養是一種將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統的部分組織,如大腦皮層、海馬、脊髓腦組織等,直接取出后在體外進(jìn)行接種培養的方法。是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統的組織取出后,在體外進(jìn)行培養和研究的實(shí)驗技術(shù)。主要用于研究神經(jīng)元的生物學(xué)特性、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)退行性疾病的機理等。
  神經(jīng)元原代培養的培養步驟:
  1、準備實(shí)驗材料:包括培養基、細胞培養試劑、培養器具等。
  2、取材:通過(guò)異交法得到小鼠胚胎,在胚胎發(fā)育第15-17天時(shí)取材。
  3、分離大腦皮層組織:將小鼠胚胎處死后,迅速取出大腦并置于無(wú)菌的PBS緩沖液中。移除大腦的外圍組織,僅保留皮層組織。
  4、組織消化:將皮層組織切碎成小塊,加入含有0.05%胰蛋白酶和0.1%DNA酶的消化液,室溫下消化15-20分鐘。
  5、離心與清洗:將消化液中的細胞懸液離心處理,用PBS緩沖液洗滌1-2次,去除消化液中的酶和雜質(zhì)。
  6、細胞計數與分裝:通過(guò)顯微鏡和細胞計數板對細胞懸液進(jìn)行計數,稀釋并分裝得到所需細胞濃度。
  7、接種:將細胞懸液接種到預先涂覆了聚-L-賴(lài)氨酸的培養皿中,使細胞均勻附著(zhù)在培養皿表面。
  8、添加培養基:加入預先配制好的培養基,為細胞提供營(yíng)養和生長(cháng)因子。
  9、培養條件控制:將培養皿放置于恒溫培養箱中,保持37°C、95%濕度和5%CO?濃度。定期更換培養基以維持細胞生長(cháng)。
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